




一文了解亲和层析柱装柱注意事项
亲和层析 一般用于纯化蛋白质和---等大分子物质的方法的主要依据是各种大分子物质之间理化特性的差---。下面我们来分析一下亲和层析过程中的注意事项。
1.上样
亲和层析纯化生物大分子通常采用柱层析的方法。亲和层析柱一般很短,通常10cm左右。上样时应注意选择适当的条件,包括上样流速、缓冲液种类、ph、离子强度、温度等,以使待分离的物质能够充分结合在亲和吸附剂上。
一般生物大分子和配体之间达到平衡的速度很慢,所以样品液的浓度不易过高,上样时流速应比较慢,以---样品和亲和吸附剂有充分的接触时间进行吸附。
---是当配体和待分离的生物大分子的亲和力比较小或样品浓度较高、杂质较多时,可以在上样后停止流动,让样品在层析柱中反应一段时间,或者将上样后流出液进行二次上样,以增加吸附量。样品缓冲液的选择也是要使待分离的生物大分子与配体有较强的亲和力。另外样品缓冲液中一般有一定的的离子强度,以减小基质、配体与样品其它组分之间的非特---吸附。
生物分子间的亲和力是受温度影响的,通常亲和力随温度的升高而下降。所以在上样时可以选择适当较低的温度,使待分离的物质与配体有较大的亲和力,树脂柱厂家,能够充分的结合;而在后面的洗脱过程可以选择适当较高的温度,使待分离的物质与配体的亲和力下降,以便于将待分离的物质从配体上洗脱下来。
上样后用平衡洗脱液洗去未吸附在亲和吸附剂上的杂质。平衡缓冲液的流速可以快一些,但如果待分离物质与配体结合较弱,平衡缓冲液的流速还是较慢为宜。如果存在较强的非特---吸附,树脂柱厂家供应,可以用适当较高离子强度的平衡缓冲液进行洗涤,树脂柱生产厂家,但应注意平衡缓冲液不应对待分离物质与配体的结合有明显影响,以免将待分离物质同时洗下。
吸附作为一种低能耗的固相萃取分离技术在工业上已有广泛的应用,常用的吸附剂主要有活性炭、改性纤维素、黏土、硅胶等。而应用为广泛的活性炭,由于其机械强度差、使用寿命短且再生困难,导致运行成本偏高,影响了其在工业上的推广应用。
目前,随着功能高分子材料的迅速发展,大孔吸附树脂成为一种特殊的吸附材料引起了人们的关注。大孔吸附树脂是一种人工合成的具有多孔立体结构的聚合物吸附剂,是在离子交换剂和其他吸附剂应用基础上发展起来的一类新型树脂,它主要依靠和被吸附的分子(吸附质)之间的范德华引力,通过---的比表面进行物理吸附而工作的,在实际应用中,对一些与其骨架结构相近的分子如芳香族环
状化合物尤其具有很强的吸附能力。大孔吸附树脂不溶于酸、碱及,化学性质稳定,并可通过分子间的作用力,从水溶液中富集、分离和回收有机物质,与活性炭相比,大孔吸附树脂具有孔分布窄、机械强度好、容易脱附再生等优点,树脂柱厂家批发,值得研究。
离子交换柱主要是利用离子交换树脂中的离子与原水(液)中的某些离子进行交换而将其除去,使水(液)得到净化的方法.
1.树脂的选择和处理
在化学分析中应用多的为强酸性阳离子交换树脂和强碱性阴离子交换树脂.使用时应当先过筛以除去太大和太小的颗拉,也可以用水泡胀后用筛在水中选取大小一定的颗粒备用.
一般商品树脂含有一定杂质,使用前必须进行净化处理.强碱性和强酸性阴阳离子交换树脂,通常用4mol/lhcl溶液浸泡1-2天,以溶解各种杂质,然后用蒸馏水洗涤至中性.如果需要钠型阳离子交换树脂,则用nacl处理氢型阳离子交换树脂.
2.装柱
进行离子交换通常在离子交换柱中进行.离子交换柱一般用玻璃制成,装置交换柱时,先在交换柱的下端铺上一层玻璃丝,灌入少量水,然后倾入带水的树脂,为防止加试液时树脂被冲起,在柱的上端亦应铺一层玻璃纤维.交换枝装好后,再用蒸馏水洗涤,关上活塞,以备使用.应当注意不能使树脂露出水面,因为树脂露于空气中,当加入溶液时,树脂间隙中会产生气泡,而使交换不完全.
交换柱也可以用滴定管代替.
3.交换
将试液加到交换柱上,用活塞控制一定的流速进行交换.
4.洗脱
当交换完毕之后,一般用蒸馏水洗去残存溶液,然后用适当的洗脱液进行洗脱.在洗脱过程中、上层被交换的离子先被洗脱下来,经过下层未被交换的树脂时,又可以再度被交换.
阳离子交换树脂常采用hcl溶液作为洗脱液;阴离子交换树脂常采用nacl或naoh溶液作为洗脱液.洗脱之后的树脂已得到再生,用蒸馏水洗涤干净即可再次使用.
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