




层析柱的规格
层析柱的直径大小不影响分离度,样品用量大,可加大柱的直径,一般制备用凝胶柱,直径大于2厘米,但在加样时应将样品均匀分布于凝胶柱床面上。此外, 直径加大,洗脱液体体积增大,树脂柱价格,样品稀释度大。分离度取决于柱高,为分离不同组分,凝胶柱床必须有适宜的高度,分离度与柱高的平方根相关,但由于软凝胶柱过高挤压变形阻塞,一般不超过1米。分族分离时用短柱,一般凝胶柱长20-30厘米,柱高与直径的比较5:1─10:1,凝胶床体积为样品溶液体积的4-10倍。分级分离时柱高与直径之线为20:1─100:1,常用凝胶柱有50×25厘米,10×25厘米。层析柱滤板下的死体积应尽可能的小,如果支掌滤板下的死体积大,被分离组分之间重新混合的可能性就大,其结果是影响洗脱峰形,出现拖尾出象,降低分辩力。在分离时,死体积不能超过总床体积的1/1000。
在大孔吸附树脂的应用过程中,也需要注意一些问题:
储存与运输的过程中,要防止树脂脱水或受冻而被破坏;
使用前应按照一定的步骤进行预处理,以去除树脂内可能含有的分散剂、致孔剂、惰性溶剂等化学残留;
在树脂装柱运行后,树脂柱供应,可能有堵塞发生,造成的原因主要有悬浮物污堵、生物
堵塞、铁及镁污染和---钙沉淀,应采用相应的处理措施将堵塞物去除;
脱附工艺中会产生碱性脱附液,需要进一步处理。
层析柱装柱步骤流程
1.hetp计算
所用样品为1.0%nacl或纯溶液,上样大约为总柱床体积的1%。对于34和50μm的填料,使用的线性流速应为30 cm/h,90μm的填料选择20 cm/h的线性流速。通过下式计算hetp:
hetp = l/n
其中l为柱床高度(cm),n为理论塔板数,n=5.54 (ve/wh)2;
ve为洗脱体积(ml),树脂柱生产厂家,wh峰高一半处的峰宽(ml)。
2.峰对称因子计算
洗脱峰的峰形应尽可能对称,树脂柱,即对称因子尽可能接近1。as按下列公式计算:
as = b/a
其中,a为峰高10%处的前半个峰宽,b为峰高10%处后半个峰宽。
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