




层析柱装柱步骤流程
1.hetp计算
所用样品为1.0%nacl或纯溶液,上样大约为总柱床体积的1%。对于34和50μm的填料,使用的线性流速应为30 cm/h,树脂柱厂家供应,90μm的填料选择20 cm/h的线性流速。通过下式计算hetp:
hetp = l/n
其中l为柱床高度(cm),n为理论塔板数,n=5.54 (ve/wh)2;
ve为洗脱体积(ml),wh峰高一半处的峰宽(ml)。
2.峰对称因子计算
洗脱峰的峰形应尽可能对称,即对称因子尽可能接近1。as按下列公式计算:
as = b/a
其中,a为峰高10%处的前半个峰宽,b为峰高10%处后半个峰宽。
平衡柱子
即用洗脱剂中极性小的溶剂(例如、、等)用计量泵(或氮气)打入(压入)层析柱上端。此溶剂因极性小于硅胶,不会把吸附在硅胶上端面的物料中有用物质洗脱下来,而只能将物料中的极性很小的油脂等杂质洗下。另外,此过程还可以将柱中硅胶中的大量空气往下赶出柱外。这个过程俗称“平衡”柱子或“平衡”吸附剂。可使硅胶被溶剂浸润,且排出空气,有利于续后的洗脱分离过程。
当平衡用的溶剂从柱---出后,可以停止此过程,改用洗脱剂洗脱分离过程;平衡过程也可以再理行一段时间,将柱子中的空气多排出一些,但溶剂耗量也会增加。
柱头安装是否合适及是否严密的检查
1、检查下柱头是否按图纸要求安装?(要求按图纸要求安装)
2、检查下柱头内,是否安装了防止吸附剂(例如硅胶)漏出的滤布(或滤网)。
3、所用滤布(滤网)的材质要求---所用溶剂的腐蚀,树脂柱厂家,而且孔径很小,一般要求使用500目以上孔径大小的滤布(网)。
4、下柱头安好,紧固后,从柱上端(开口)加入所用洗脱剂中极性较小的一种溶剂(例如已烷、、等),使溶剂液面比下柱头上部分离出20-30厘米,仔细观察下柱头是否漏溶剂。如果漏,树脂柱厂家批发,则必须坚固(或重装),直至不漏为止。
5、检查确实不漏后,放出柱内溶剂,准备装吸附剂(例如硅胶等)。
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