层析柱的操作方法
以中压柱层析法提取分离冬凌草甲素为例：
1.吸附剂的处理及柱子装填
将一定量薄层层析硅胶装入搪瓷盘置于烘箱中，于105。c活化2h后，取出放置室温即可装柱。柱子采用干法填充，填满整个柱体，不留死体积，密封后用柱塞式计量溶剂泵按一(5：95)比例泵入溶剂，至溶剂流出止。
2.上样
将冬凌草的---提取物400g用适量溶解，泵入中压柱柱头，然后泵入1000rid。
3.洗脱
以一定比例的一为洗脱液，60ml/min的流速进行梯度洗脱，柱的使用压力为2～ 3kg/c 。按每份500ml收集，tlc检识展开剂一(2：8)，显色剂5%香草醛---液
至洗脱完全，相同流份合并，回收溶剂。将冬凌草甲素流份合并蒸干。加入适量热溶后自然放置，析出结晶，为冬凌草甲素。
4.层析柱再生、平衡
有效成分经tlc检识全部流出后，用纯5000ml再生，一(5：95)平衡后，可再次上样，反复使用(使用次数随原料不同而异，一般可连续使用2—6个月以上)。
5.重结晶
冬凌草甲素结晶析出完全后，减压过滤，然后用少量洗涤(洗涤液保留，作下次热溶冬凌草甲素用)。将冬凌草甲素再用适量热溶后放置，保定大孔树脂柱，结晶再次析出，待结晶完全后，抽滤，用少量洗涤，将结晶室温下晾干后置真空干燥箱中，大孔树脂柱生产厂家，35度真空干燥至恒重。密封于瓶中，置干燥器中保存。
6.薄层层析分析
取适量冬凌草甲素对照品及由上述方法得到的冬凌草甲素样品溶解后点于同一硅胶g薄层板上，以一(8：2)为展开剂进行展开，5% 香草醛---液显色，于105。c烘至斑点清晰。表明在该展开系统下，冬凌草甲素样品和对照品都具有相同的rf值，并呈现出同样的蓝绿点，在制备的冬凌草甲素样品中，没有杂质斑痕。
影响大孔吸附树脂吸附性能的主要因素 大孔吸附树脂的分离效果受溶液的ph值、吸附质的极性、分子大小、树脂柱的清洗和洗脱液的种类等因素制约，同时也与外界的温度和压强有关。影响其吸附性能的主要因素如下:(1)大孔吸附树脂的比表面积越大，一般吸附性能越好，吸附量越多。(2)大孔吸附树脂的孔径越大，大孔树脂柱多少钱，吸附质分子在孔内的扩散速度也越大，有利于达到吸附平衡。经验表明，当吸附剂孔径与吸附质分子的直径比为6∶ 1左右时，吸附性能。(3)随着孔容的增加，大孔吸附树脂的吸附量增加。(4)大孔吸附树脂孔径的大小，直接影响不同大小分子的自由进入，从而使树脂吸附具有选择性。只有当孔径对于被吸附组分足够大时，比表面积才能充分发挥作用，且大孔吸附树脂的孔径分布越窄，吸附性能越好。(5)极性树脂较易吸附极性物质，非极性树脂较易吸附非极性物质。(6)若大孔吸附树脂上的功能基团与吸附质分子之间可以形成氢键或电子转移络合物，则有较强的吸附作用。(7)大孔吸附树脂的吸附一般都是放热过程，温度升高，吸附量将减少。(8)压强是影响大孔吸附树脂吸附的因素之一，压强越大，吸附量越多，而吸附速率也随着压强的增大而增大。(9)当溶液中存在两种以上溶质时，大孔树脂柱价格，往往会引起一种溶质易吸附而另一种溶质的吸附量降低，一般来讲，对混合溶质的吸附较纯溶质的吸附效果差。(10)其中大孔吸附树脂丰富的微孔结构也是影响吸附量的重要因素
大孔吸附树脂的分类
根据树脂极性的不同，大孔吸附树脂可以分为非极性、中极性、极性和强极性四类.
非极性吸附树脂是由偶极距很小的单体聚合而成，不含任何功能基团，表面的疏水性较强，可通过与有机物的疏水部分作用而吸附溶液中的有机物，适合于从极性溶剂(如水)中吸附非极性物质。
中极性吸附树脂含有酯基，其表面兼有疏水和亲水部分，既可从极性溶剂中吸附非极性物质，也可从非极性溶剂中吸附极性物质。
极性和强极性吸附树脂一般通过静电作用吸附极性物质。
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