




凝胶是一类多孔性高分子聚合物,每个颗粒---一个筛子。当样品溶液通过凝胶柱时,相对分子较大的物质由于直径大于凝胶网孔而只能沿着凝胶颗粒间的空隙,随着溶剂流动,因此流程较短,向前移动速度快而首先流出层析柱;反之,相对分子较小的物质由于直径小于凝胶网孔,可自由地进出凝胶颗粒的网孔,在向下移动过程中,它们从凝胶内扩散到胶粒孔隙后再进入另一凝胶颗粒,如此不断地进入与逸出,使流量增长,移动速率慢而后流出层析柱。而中等大小的分子,它们也能在凝胶颗粒内外分布,部分进入颗粒,从而在大分子物质与小分子物质之间被洗脱。这样,经过层析柱,使混合物中的各物质按其分s子大小不同而被分离。
层析柱的规格
层析柱的直径大小不影响分离度,样品用量大,层析柱,可加大柱的直径,一般制备用凝胶柱,直径大于2厘米,但在加样时应将样品均匀分布于凝胶柱床面上。此外,层析柱供应, 直径加大,洗脱液体体积增大,样品稀释度大。分离度取决于柱高,为分离不同组分,层析柱生产厂家,凝胶柱床必须有适宜的高度,分离度与柱高的平方根相关,但由于软凝胶柱过高挤压变形阻塞,一般不超过1米。分族分离时用短柱,一般凝胶柱长20-30厘米,柱高与直径的比较5:1─10:1,凝胶床体积为样品溶液体积的4-10倍。分级分离时柱高与直径之线为20:1─100:1,常用凝胶柱有50×25厘米,10×25厘米。层析柱滤板下的死体积应尽可能的小,如果支掌滤板下的死体积大,被分离组分之间重新混合的可能性就大,其结果是影响洗脱峰形,出现拖尾出象,降低分辩力。在分离时,层析柱价格,死体积不能超过总床体积的1/1000。
---的不锈钢层析柱使用技巧
加压过柱是一种比较好的方法, 与常压柱类似, 但用外加压力可以使淋洗剂走的快些。压力的提供可以是压缩空气,双连球或者小气泵 (用鱼缸供气的加压泵就行)。---是在容易分解的样品的分离中很适用。
一般压力不可过大,不然溶剂走的太快就会减低分离效果。因为加压过柱, 分离效果较好, 所以加压过柱在普通的有机化合物的分离中是非常适用的。
一些低沸点溶剂装柱时往往会在柱子中产生气泡, 使柱子变花, 利用加压过柱法在装柱时就可以有效地解决这个问题, 而且可以使柱子很快装实。
随着科技的发展, 色谱法的技术也日新月异, 但柱层析实验技术还是比较简单和实用的, 每个科研---在使用柱层析时, 可以根据自己的实际情况来不断地摸索,不断地总结和提高不锈钢层析柱的实验技术。
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